P311蛋白在治療皮膚創面中的用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物醫學治療技術領域，具體設及P311蛋白在治療皮膚創面中的用 途。
【背景技術】
[0002] 創傷、燒傷、手術等引起的皮膚創面是最常見的臨床問題之一。如何有效促進創面 愈合、避免癒痕形成是治療皮膚創面的關鍵。但由于對創面愈合和癒痕形成的機制不甚清 楚，導致對創面和癒痕的治療效果十分有限。目前認為，肌成纖維細胞在創面正常愈合和癒 痕形成中發揮關鍵作用；肌成纖維細胞產生的強大收縮力可W促進創面的快速閉合，但是 如果肌成纖維細胞活性持續升高，則會導致癒痕形成。雖然創周的成纖維細胞是肌成纖維 細胞的來源之一，但近幾年的研究表明，基底層的表皮干細胞也可能通過向肌成纖維細胞 轉分化的方式參與到創面修復。此外，上皮間質轉化也是癒痕形成和腫瘤惡化的主要機制 之一。因此，調控表皮干細胞向肌成纖維細胞的轉分化，可能是促進創面愈合和防治癒痕形 成的一種新的治療策略。
[0003]目前臨床上用于治療皮膚創面的藥物，大致可分為抗感染和生長因子兩類。其發 揮促進創面愈合的機制也不同；抗感染藥物和炎性細胞刺激因子等W調控炎癥反應為主， 表皮生長因子W調控表皮細胞為主，堿性成纖維細胞生長因子W調控成纖維細胞為主。但 仍未有特異性調控肌成纖維細胞，尤其是表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化的藥物。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是為皮膚創面愈合提供一種新的治療策略。
[0005] 本發明的技術方案是發現一種特異調控表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化的藥 物，其主要活性成分是P311蛋白。
[0006] 進一步的，所述P311蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。
[0007] 進一步的，所述編碼P311蛋白的核甘酸序列如SEQIDNo.2所示。
[0008] 本發明還提供了促進皮膚創面愈合的藥物，其特征在于：主要活性成分是P311蛋 白。
[0009] 進一步的，所述P311蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。
[0010] 進一步的，所述編碼P311蛋白的核甘酸序列如SEQIDNo.2所示。
[0011] 本發明還提供了P311蛋白在制備特異調控表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化的 藥物中的用途。
[0012] 本發明還提供了P311蛋白在制備創面修復藥物中的用途。
[0013] SEQIDNo.1P311蛋白的氨基酸序列；
[0014] mvyypelfvwvsqepfpnkdmegrlpkgrlpvpkevnrkkndetnaasltplgsselrsp risylhff
[001引沈Q IDNo.2編碼P311蛋白的棱甘酸序列：
[0016]atggtttattacccagaactctttgtctgggtcagtcaagaaccatttccaaacaaggaca t咨咨a咨咨咨aa咨咨cttcctaa咨ggaagacttcct咨tcccaaaggaagtgaaccgcaagaagaacgatgagac aaacgctgcctccctgactccactgggcagcagtgaactccgctccccaagaatcagttacctccacttt ttttaa
[0017] 本發明的P311蛋白可通過常規的蛋白表達和純化技術獲得。用于傳送藥物的載 體可W是凝膠，也可W是生物敷料，也可W是經過基因改造后的細胞載體，該些載體可通過 商業化途徑購得，也可根據標準的制作流程獲得。搭載所述P311蛋白的各種藥物載體，只 需按照常規使用，無需特殊操作，本領域的臨床醫生能夠結合本產品特點正確使用。
[0018] 首先，通過組織病理學技術對燒傷早期患者標本檢測，發現P311蛋白的分布與表 皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化發生的部位一致，均在新生表皮中（圖1)。然后，通過腺病 毒轉染使體外培養的人和小鼠表皮干細胞高表達P311蛋白，證實P311可促進表皮干細胞 向肌成纖維細胞的轉分化（圖2、3)。最后，在建立P311野生型和敲基因小鼠淺ir燒傷 動物模型的基礎上，發現P311敲除后表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化下降，傷口愈合速 度也下降（圖4、5)。綜上，發明人發現并證實了P311蛋白可W促進表皮干細胞向肌成纖維 細胞轉分化，進而加速燒傷創面愈合，防治癒痕形成。
[0019] 本發明的有益效果；本發明通過對燒傷患者標本檢測、細胞實驗和動物實驗發現 并證實了P311蛋白可W促進表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化，進而加速燒傷創面愈合， 防治癒痕形成。本發明從調控創面愈合中的肌成纖維細胞入手，發現了新的特異調控蛋白 P311蛋白。本發明發現的P311蛋白將會為促進創面愈合、預防癒痕形成提供一種新的治療 策略，將為燒傷患者、糖尿病足患者W及外科手術患者等具有皮膚創面的患者帶來福音，具 有廣闊的應用和市場前景。
【附圖說明】
[0020] 圖1、燒傷患者皮膚中表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化標志物和P311的分布 特點。A為燒傷患者連續切片的肥（蘇木素伊紅）染色和免疫巧光染色。肌成纖維細胞 標志a-平滑肌肌動蛋白標記為紅色，表皮干細胞標志角質蛋白19標記為綠色，細胞核 DAPI(4'，6-二脈基-2-苯基嘲噪）標記為藍色。B為間質細胞標記Vimentin在表皮和真 皮中的表達，Vimentin標記為紅色，細胞核DAPI(4'，6-二脈基-2-苯基嘲噪）標記為藍色。 C為P311蛋白在燒傷患者新生表皮（左）和正常皮膚（中）的表達，褐色為陽性區域，藍色 為蘇木素復染后的細胞核。PBS代替一抗，作為陰性對照組（右圖）。
[0021] 圖2P311促進體外培養的人表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化。P311腺病毒轉 染人表皮干細胞72小時。A、免疫巧光染色觀察a-平滑肌肌動蛋白和表皮標志物上皮細 胞巧粘蛋白的表達。B、a-平滑肌肌動蛋白單陽性和上皮細胞巧粘蛋白單陽性細胞比例。 **，P<0.01，與空載體組相比。
[0022] 圖3P311促進體外培養的小鼠表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化。P311腺病毒 轉染小鼠表皮干細胞72小時。免疫巧光染色觀察a-平滑肌肌動蛋白、波形蛋白和上皮細 胞巧粘蛋白的表達。
[0023]圖4P311敲除小鼠燒傷傷口愈合減慢。A、P311野生型和敲基因小鼠淺II。燒傷 后，大體觀察傷口愈合規律。B、定量分析傷口面積的變化規律。C、形態定量分析表皮間距。 *，P<0.05,與野生型小鼠相比；**，P<0.01，與野生型小鼠相比。D、形態定量分析新生表皮 長度。*，P<0. 05,與野生型小鼠相比；**，P<0. 01，與野生型小鼠相比。
[0024]圖5P311敲除小鼠傷口中表皮干細胞向肌成纖維細胞轉分化現象減少。A、肥（蘇 木素伊紅）染色觀察傷口細胞形態變化。B、免疫巧光染色觀察波形蛋白在表皮和真皮中的 表達，波形蛋白標記為紅色，細胞核DAPI(4'，6-二脈基-2-苯基嘲噪）標記為藍色。C、免 疫巧光染色觀察a-平滑肌肌動蛋白在表皮和真皮中的表達，a-平滑肌肌動蛋白標